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如何看待C18的液相色谱固定相?
发布时间:2020-03-06   点击次数:89次

    早在20世纪初,植物学家Mikhail Tsvet为了分离植物中天然色素,设计了最早的色谱实验:碳酸钙被置于玻璃管中,石油醚被选作流动相,不同的色素按疏水性由强至弱的顺序被洗脱。经过数十年的发展,5um~10um大小的球形硅胶颗粒,也就是现在被广泛应用于HPLC系统的商品化色谱柱才开始大规模生产。与Tsvet实验类似的色谱模式,被称为正相色谱(normal phase chromatography)。相对应的,组分的洗脱顺序相反,疏水性强的化合物更晚被洗脱的情况,则被称为反相色谱(reversed-phase chromatography)。反相色谱已经成为了现今应用广泛的色谱模式。为了在反相色谱体系中达到理想的分离效果,亚游体育app对固定相、流动相、温度等等参数一一进行优化。接下来亚游体育app将讨论一个简单情况:各组分按疏水性差异被依次洗脱。

        今天的主角:C18。C18现今的“江湖地位”可以说是天时、地利、人和三者相互结合的结果: 

   C18分子本身与样品组分,进行简单的疏水相互作用,不受二级作用(例如,氢键)的干扰。当目标组分被流动相带入硅胶孔隙中,依据疏水性的差异,不同组分在固定相上“停留”的时间也不同。

   C18与硅胶也堪称天作之合。通常情况下,硅胶基质色谱填料,通过硅烷化试剂与硅胶表面的硅羟基进行缩合反应,以达成化学键合。而各类单功能团硅烷之中,十八烷基二甲基氯硅烷的键合反应相对更容易控制。C18在自然状态下非常稳定,小于18个碳原子的直链烷烃在物理性质上倾向于液体,不易控制。

      C18提供的疏水选择性“刚刚好”。既不会由于C链过长导致容易吸附样品(主要还是针对小分子来说,大分子仍旧容易在C18吸附),也不会因为疏水性不足而导致无法分离各组分。

     由此可见,在使用C18色谱柱时,组分在流动相中的状态应当成为亚游体育app时刻关注的一个重要点。

 

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